Хотя в январе 1564 года армия ВКЛ во главе с гетманом М. Радзивиллом почти целиком уничтожила 30-тысячное войско царя, однако в дальнейшем княжество не имело шансов выстоять против московской агрессии.
В январе 1569 года в Люблине начал работу польско-литовский сейм, на котором представители Литвы предложили создать унию двух стран, сохранив при этом оба законодательных учреждения — соответственно в Польше и Великом княжестве Литовском. Но собирать их вместе предполагалось только при выборах короля и для решения внешнеполитических вопросов. Не встретив поддержки, литовские и часть украинско-белорусских магнатов покинули заседания сейма. Тогда Си-гизмунд II Август, опираясь на поддержку менее состоятельной шляхты, в марте и мае присоединил к Польше Подляшье и Волынь, а 5 июня по просьбе местной аристократии включил в состав польской короны Брацлавщину и Киевщину. 1 июля вернувшиеся на сейм делегаты от Великого княжества Литовского согласились с планом образования Речи Посполитой (Res Publica) — унии Польши с Литвой. Выборный -король Польши при этом становился и великим князем Литовским, создавался объединенный сейм, общая монетная система, шляхта получала право владеть земельными угодьями на всей территории Речи Посполитой. В то же время Великое княжество Литовское сохранило право на собственный герб и государственную печать, законодательство, армию, финансы и администрацию.
Таким образом, более чем на 220 лет большинство украинских земель оказалось под властью польских шляхтичей. Только часть украинского Полесья осталась у Литвы, северную Буковину удерживала Молдавия (с 1514 года — Турция). Восточная часть Карпатской Украины после 1526 года оказалась в руках Австрии, западную заняла Трансильвания; Чернигово-Сиверская земля контролировалась Российским государством (с 1618 г. она перешла к Речи Посполитой).