Война с папой. Климент VII, человек трусливый и нерешительный, безусловно, в глубине души, как папа и итальянец, был противником императора. Победа приПавии в высшей степени обеспокоила и папу, и Венецию, и всех итальянцев. Продолжительная военная оккупация требовала огромных расходов на содержание оккупантов; помимо этого, население страдало от произвола военачальников и недисциплинированности солдат. Все это приводило к непрерывно учащавшимся протестам.
В мае 1526 г. между Францией, Венецией, Флоренцией, Миланом и папой, при поддержке Англии, оформился союз, носивший название «святой лиги». Своею целью союз ставил освобождение Северной Италии от войск Карла, а в случае сопротивления последнего, отторжение Неаполя и освобождение детей Франциска I, оставленных Карлом в качестве заложников до выполнения Мадридского договора.
Карлу было известно из сообщений командующего его войсками Пескары о событиях, назревавших в Италии. Через своих послов герцога де Сесса и Уго де Монкада Карл попытался отвлечь папу от его намерений. Однако папа оставил все усилия Карла без внимания. Тогда Монкада, согласно полученным инструкциям, использовал вражду между кардиналом Колонной и его домом и папой, оказав поддержку партии Колонны. Обманув Климента VII ложным соглашением, Колонна захватил папский дворец и вынудил папу бежать. Пока Климент укрывался в замке св. Ангела, партия Колонны захватила сокровища, хранившиеся в соборе св. Петра. Папа вынужден был начать переговоры с Монкадой; позже он отомстил дому Колонны, опустошив его владения.
17 сентября Карл направил папе очень важный документ, в котором не только отстаивал свои права, ной резко осуждал поведение папы и грозил собрать церковный собор, обещанный протестантам. С протестантами император действительно временно примирился в расчете на их военную помощь. Ему удалось получить от них армию в 11 ООО отборных солдат под командованием знаменитого военачальника Георга Фрундсберга, заклятого врага папы.